導讀：什么是浮島效應(yīng) 灰樹花菌絲體的液態(tài)深層培養(yǎng)過程是怎樣的?

生物浮島技術(shù)是按照自然界自身規(guī)律,運用無土栽培技術(shù)原理,采用現(xiàn)代農(nóng)藝與生態(tài)工程措施綜合集成的水面無土種植植物技術(shù)。以人工方式把高等水生植物或改良的陸生植物無土種植到富營養(yǎng)化水域水面上,通過植物根系的截留、吸收、吸附作用和物種競爭相克機理、水生動物的攝食

灰樹花菌絲體的液態(tài)深層培養(yǎng)過程是怎樣的?

1.搖瓶培養(yǎng)液體菌種 這是液態(tài)深層生產(chǎn)灰樹花菌絲體工藝中最基本的技術(shù)。搖瓶培養(yǎng)的液體菌種數(shù)量較少，可供發(fā)酵罐接種用，也可直接用于栽培生產(chǎn)，一般適用于擴接固體菌種（主要是栽培種），生產(chǎn)規(guī)模不大的菌種廠適宜采用。用搖瓶培養(yǎng)液體菌種，周期短，可連續(xù)多次擴大培養(yǎng)（不超過5次），對發(fā)菌速度、菌種質(zhì)量一般無不良影響。

將培養(yǎng)液裝入500毫升三角燒瓶內(nèi)，每瓶裝量為100毫升，加入10～15粒小玻璃珠或直徑在0.8厘米以下的玻璃碎片，用棉塞和牛皮紙封口，121℃滅菌40分鐘，取出冷卻至28℃時接種。每瓶接入斜面母種數(shù)小塊，使氣生菌絲一面向上懸浮于液面，在24～26℃恒溫下靜止培養(yǎng)48小時。當氣生菌絲延伸到培養(yǎng)液中時，置往復式搖床上進行振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/分，振幅（沖程）6～10厘米；如果用旋轉(zhuǎn)式搖床，偏心距為4厘米，振蕩頻率為150～220轉(zhuǎn)/分，因旋轉(zhuǎn)速度過快，菌絲球一般較大，且菌絲球表面絨毛狀菌絲少，不適于做菌種使用。因此，一般旋轉(zhuǎn)式搖床的偏心距應(yīng)作適當調(diào)整方可使用。搖床室溫度控制在24～26℃，培養(yǎng)72～96小時。食用菌種類不同，搖床培養(yǎng)的技術(shù)參數(shù)也有區(qū)別，灰樹花一般在25℃，200轉(zhuǎn)/分鐘，偏心距4厘米，搖瓶3～4天培養(yǎng)結(jié)束，培養(yǎng)液呈黃棕色，清澈透明，有許多菌絲小球，鏡檢菌絲球直徑，要求在1～2毫米內(nèi)。取樣品離心過濾（2500轉(zhuǎn)/分，15分鐘），105℃烘干至恒重，稱菌絲體干重，達10克/升即可。這樣的菌種可再擴接于三角瓶內(nèi)，每瓶接種菌液10毫升，繼續(xù)擴大進行搖瓶培養(yǎng)，因菌絲球正處于旺盛生長狀態(tài)，分散度好，能縮短搖瓶培養(yǎng)時間，快者2天即可終止培養(yǎng)。如果培養(yǎng)液混濁，大多是細菌污染的結(jié)果。培養(yǎng)液經(jīng)顯微鏡檢查合格后，方可用于生產(chǎn)。搖瓶培養(yǎng)的液體菌種，在4℃冰箱中保存20～30天，在15～20℃室溫中保存5～7天，對接種成功率、產(chǎn)量均無不良影響。

在生產(chǎn)實踐中，也可因陋就簡利用大號玻璃瓶制備液態(tài)菌種，但要有效果較好的空氣過濾裝置。

2.菌絲體的三級擴大培養(yǎng) 一級種子罐定容35升，搖瓶種子通過裝有閥門的接種管接入，按5%～7%的比例接入搖瓶種子1.5～2升，按發(fā)酵工藝培養(yǎng)成熟；一級種子再接入二級種子罐，定容350升，按10%接入一級種子35升，培養(yǎng)成熟。無論哪一級菌種罐，在接種前須先將罐體空罐消毒（135～140℃）1小時，再注入培養(yǎng)液實消。程序是先預(yù)熱夾層至90℃，10分鐘后，放蒸氣進入內(nèi)層升至115℃左右飽壓恒溫8分鐘，不宜過久，以免破壞養(yǎng)分。然后向夾層注灌冷水降溫，降至26℃即可接種。接種時，要注意開排氣口，關(guān)進氣口，降壓至0.05兆帕。同時抽樣鏡檢并用肉湯培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)液滅菌情況。0時，取樣檢查雜菌、0.D值（光密度）、初糖；12、24、36、48小時，各取樣檢查一次0.D值、殘?zhí)?、pH。正常培養(yǎng)48小時后，pH降至5.0，0.D值凈長0.5左右，糖耗一個單位左右，即可轉(zhuǎn)接容積較大的第三級培養(yǎng)罐。

第三級培養(yǎng)罐容積10噸，一般定容7500升，培養(yǎng)液與消泡劑（聚環(huán)氧丙烷甘油醚）同時加入，消泡劑加入量占培養(yǎng)液的0.03%為2.5升。按10%接種量（2個二級種子罐接1個三級罐）接入菌種。先空消罐體（14 0℃）1小時，再實消（115～118℃）50～60分鐘，然后降至25℃接種。前期培養(yǎng)溫度25～26℃，后期26～27℃。pH控制在5.5左右，降低時則流加尿素，加量一般為培養(yǎng)液的0.2%。發(fā)酵前期通風量1∶05（體積/體積），中期溫度上升可加大通風量至1∶1，并防止pH下降過快。接種后，葉輪轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)72小時后，中間每隔12小時取樣測糖、氮、pH、雜菌。中途補料可增加菌絲生長速度，縮短發(fā)酵時間，增加菌體濃度。補料可分次在20小時、40小時、60小時補入，補入料量視具體情況而定。

注意控制培養(yǎng)時間，過早放罐菌絲體產(chǎn)量低，太遲則菌體老化自溶，三級罐一般培養(yǎng)3～4天即可。放罐標準：pH下降至5，殘?zhí)?.5左右，氨態(tài)氮不超過30毫克/毫升，菌球濃度達到1000～1500個/毫升，或經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，每100毫升菌泥濕重在20～25克。

液體菌種發(fā)酵要根據(jù)菌類生長要求選擇不同工藝條件，灰樹花一般控溫25℃，罐壓0.05兆帕，通氣量（液體∶氣體）1∶0.3～0.5，攪拌200轉(zhuǎn)/分。

檢查發(fā)酵液質(zhì)量項目包括：純度檢查，鏡檢或平板培養(yǎng)無細菌、霉菌檢出；活力檢查，鏡檢菌球邊緣菌絲分枝細密，用結(jié)晶紫染色時著色深，菌絲細胞原生質(zhì)尚未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象和空泡，培養(yǎng)液靜止5分鐘，菌泥不下沉；80%菌球直徑小于1毫米。

培養(yǎng)液經(jīng)板框壓濾或連續(xù)離心分離得菌絲體，經(jīng)烘干可以直接食用或作飲料、食品添加劑；也可提取灰樹花胞內(nèi)多糖，培養(yǎng)液濃縮可得胞外多糖，均可作為制備藥物的原料。

含大量菌絲的培養(yǎng)液可代替母種用于原種生產(chǎn)，也可代替原種用于栽培種生產(chǎn)。用液體菌種擴大的菌種，發(fā)菌快，活力強，用于栽培定植快、污染率低。在大規(guī)模栽培中，菌絲體液可注接已滅過菌的栽培袋，一個5噸發(fā)酵罐，3天內(nèi)便可生產(chǎn)3.5噸液體菌種，按5%的接種量計算，500克干料的栽培袋注入液體菌種25毫升，3.5噸液體菌種可接種70噸培養(yǎng)料，約14萬個栽培袋。

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